1ng / ml - 100ng / ml Standardowy zestaw testowy Sandy Progesteron Sandwich ELISA Test

Zestaw ELISA do badania psiego Progesteronu z wysoką intensywnością i czułością

Nr kat E0057Ca

Standardowy zakres krzywej : 1ng / ml - 100ng / ml

Czułość : 0,51ng / ml

Rozmiar : 96 dołków

Przechowywanie : Przechowywać odczynniki w temperaturze 2-8 ° C. W przypadku przechowywania przez ponad 6 miesięcy należy zapoznać się z datą ważności przechowywaną w temperaturze -20 ° C. Unikaj powtarzających się cykli odwilży. Jeśli pojedyncze odczynniki są otwarte, zaleca się, aby zestaw był używany w ciągu 1 miesiąca.

* Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do użytku badawczego, a nie do użytku w procedurach diagnostycznych. Przed użyciem zaleca się przeczytanie tej instrukcji.

Ntend U se

Ten zestaw kanapkowy służy do dokładnego wykrywania ilościowego psiego progesteronu (znanego również jako PROG) w surowicy, osoczu, supernatantach hodowli komórkowej, lizatach komórkowych, homogenatach tkankowych.

Kolekcja próbek

Surowica Pozwól surowicy skrzepnąć przez 10-20 minut w temperaturze pokojowej. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez 20 minut.

Osocze Zdobywaj osocze, używając EDTA lub heparyny jako antykoagulantu. Wirować próbki przez 15 minut przy 2000-3000 obrotów na minutę w temperaturze 2 - 8 ° C w ciągu 30 minut od pobrania.

Mocz zbierać sterylną rurką. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut. Podczas gromadzenia płynu ustno-otrzewnowego i płynu mózgowo-rdzeniowego należy postępować zgodnie z wyżej wymienionymi procedurami.

Komórka C u poz ą ę su-dernatant Gromadzić za pomocą jałowych probówek podczas badania wydzielanych składników. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut. Zbierz ostrożnie supernatanty. Podczas badania składników w komórce należy użyć PBS (pH 7,2-7,4), aby rozcieńczyć zawiesinę komórek do stężenia komórek około 1 miliona / ml. Uszkadzaj komórki przez powtarzające się cykle zamrażania i rozmrażania, aby wypuścić składniki wewnętrzne. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut.

Tkanki Wypłukać tkanki w PBS (pH 7,4) w celu dokładnego usunięcia nadmiaru krwi i zważyć przed homogenizacją. Mielimy tkanki i homogenizujemy je w PBS (pH 7,4) za pomocą szklanego homogenizatora na lodzie. Rozmrozić w 2-8 ° C lub zamrozić w temperaturze -20 ° C. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut.

P ragmentacja P

Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej.

Standard Rozpuść 120 μl wzorca (128ng / ml) za pomocą 120 μl standardowego rozcieńczalnika, aby wytworzyć standardowy roztwór podstawowy o stężeniu 64 ng / ml. Odstawić standard na 15 minut z delikatnym mieszaniem przed rozcieńczeniem. Przygotuj podwójne punkty standardowe, seryjnie rozcieńczając standardowy roztwór podstawowy (64ng / ml) 1: 2 standardowym rozcieńczalnikiem, aby uzyskać roztwory o stężeniu 32ng / ml, 16ng / ml, 8ng / ml i 4ng / ml. Standardowy rozcieńczalnik służy jako zerowy wzorzec (0 ng / ml). Pozostały roztwór należy zamrozić w temperaturze -20 ℃ i zużyć w ciągu jednego miesiąca. Proponowane rozcieńczenia roztworów standardowych są następujące:

Bufor popielnika Rozcieńczyć 20 ml koncentratu buforu płuczącego 30x do wody dejonizowanej lub destylowanej, aby uzyskać 500 ml 1x buforu płuczącego. Jeśli w koncentracie utworzyły się kryształy, delikatnie mieszaj, aż kryształy całkowicie się rozpuści.

P Rocedura

1. Przygotuj wszystkie odczynniki, roztwory standardowe i próbki zgodnie z instrukcją. Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej. Test przeprowadza się w temperaturze pokojowej.

2. Określ liczbę pasków wymaganych do testu. Wstaw paski w ramkach do użycia. Niewykorzystane paski należy przechowywać w temperaturze 2-8 ° C.

3. Dodać 50 μl wzorca do standardowej studzienki. Uwaga : Nie dodawaj przeciwciał do standardowej studzienki, ponieważ roztwór wzorcowy zawiera biotynylowane przeciwciało.

4. Dodaj 40 μl próbki do dołków do próbek, a następnie dodaj 10 μl anty-PROG przeciwciała do dołków do próbek, następnie dodaj 50 μl streptawidyny-HRP do dołków do próbek i standardowych dołków (niezawierająca ślepej próby kontrolnej). Dobrze wymieszać. Przykryj płytę uszczelniaczem. Inkubować 60 minut w 37 ° C.

5. Usuń uszczelniacz i przemyj płytkę 5 razy buforem do przemywania. Namoczyć studzienki za pomocą co najmniej 0,35 ml buforu do płukania przez 30 sekund do 1 minuty na każde płukanie. W celu zautomatyzowanego mycia odessać wszystkie studzienki i przemyć 5-krotnie buforem do przemywania, przepełniając dołki buforem do przemywania. Wymieszać płytkę na ręcznikach papierowych lub innym chłonnym materiale.

6. Dodaj 50 μl roztworu substratu A do każdej studzienki, a następnie dodaj 50 μl roztworu substratu B do każdej studzienki. Inkubować płytkę pokrytą nowym uszczelniaczem przez 10 minut w temperaturze 37 ° C w ciemności.

7. Dodaj 50 μl roztworu zatrzymującego do każdej studzienki, niebieski kolor natychmiast zmieni kolor na żółty.

8. Określ gęstość optyczną (wartość OD) każdej studzienki natychmiast za pomocą czytnika mikropłytek ustawionego na 450 nm w ciągu 10 minut po dodaniu roztworu zatrzymującego.

Referencje

[1] "Wysoki poziom ekspresji w Escherichia coli biologicznie aktywnego bydlęcego hormonu wzrostu." George HJ, L'Italien JJ, Pilacinski WP, Glassman DL, Krzyzek RADNA 4: 273-281 (1985)