Zestaw do testu ELISA firmy 96 Wells Human Deoxypyridinoline Crosslinks o wysokiej czułości i swoistości

Zestaw do testu ELISA firmy 96 Wells Human Deoxypyridinoline Crosslinks o wysokiej czułości i swoistości

Nr kat. E1455Hu

* Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do użytku badawczego, a nie do użytku w procedurach diagnostycznych. Przed użyciem zaleca się przeczytanie tej instrukcji.

P recyzja

Dokładność w ramach testu (dokładność w teście) Trzy próbki o znanym stężeniu przetestowano na jednej płytce w celu oceny precyzji wewnątrz testu.

Dokładność między testami (dokładność między testami) Trzy próbki o znanym stężeniu testowano w oddzielnych testach w celu oceny precyzji między testami.

CV (%) = SD / średnia x 100

Test wewnętrzny: CV <8%

Inter-Assay: CV <10%

Ntend U se

Ten zestaw kanapkowy służy do dokładnego, ilościowego wykrywania ludzkich wiązań krzyżowych deoksypirydynoliny (znanego również jako DPD) w surowicy, osoczu, nadsączach hodowli komórkowych, lizatach komórkowych, homogenatach tkankowych.

Powiązanie

Ten zestaw jest testem immunoenzymatycznym (ELISA). Płytkę wstępnie powleczono ludzkim przeciwciałem DPD. DPD obecny w próbce jest dodawany i wiąże się z przeciwciałami pokrytymi w studzienkach. Następnie dodaje się biotynylowane ludzkie przeciwciało DPD i wiąże się z DPD w próbce. Następnie dodaje się streptawidynę-HRP i wiąże się z biotynylowanym DPDantibody. Po inkubacji niezwiązana Streptawidyna-HRP jest wymywana podczas etapu przemywania. Następnie dodaje się roztwór substratu i kolor rozwija się proporcjonalnie do ilości ludzkiego DPD. Reakcję zakończono przez dodanie kwaśnego roztworu zatrzymującego i zmierzono absorbancję przy 450 nm.

ZALETY PODSTAWOWE

P ragmentacja P

Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej.

Standard Rozpuść 120 μl wzorca (240 nmol / L) za pomocą 120 μl standardowego rozcieńczalnika, aby wytworzyć standardowy roztwór podstawowy o stężeniu 120 nmol / L. Odstawić standard na 15 minut z delikatnym mieszaniem przed rozcieńczeniem. Przygotuj zduplikowane standardowe punkty przez seryjne rozcieńczenie standardowego roztworu podstawowego (120nmol / L) 1: 2 przy użyciu standardowego rozcieńczalnika, aby wytworzyć 60nmol / L, 30nmol / L, 15nmol / L i 7.5nmol / L roztworów. Standardowy rozcieńczalnik służy jako zerowy standard (0 nmol / L). Pozostały roztwór należy zamrozić w temperaturze -20 ° C i zużyć w ciągu jednego miesiąca. Proponowane rozcieńczenia roztworów standardowych są następujące:

Bufor do przemywania Rozcieńczyć 20 ml koncentratu buforu płuczącego 30x do wody dejonizowanej lub destylowanej, aby uzyskać 500 ml 1x buforu do przemywania. Jeśli w koncentracie utworzyły się kryształy, delikatnie mieszaj, aż kryształy całkowicie się rozpuści.

P Rocedura

1. Przygotuj wszystkie odczynniki, roztwory standardowe i próbki zgodnie z instrukcją. Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej. Test przeprowadza się w temperaturze pokojowej.

2. Określ liczbę pasków wymaganych do testu. Wstaw paski w ramkach do użycia. Niewykorzystane paski należy przechowywać w temperaturze 2-8 ° C.

3. Dodać 50 μl wzorca do standardowej studzienki. Uwaga : Nie dodawaj przeciwciał do standardowej studzienki, ponieważ roztwór wzorcowy zawiera biotynylowane przeciwciało.

4. Dodaj 40 μl próbki do dołków do próbek, a następnie dodaj 10 μl przeciwciała anty-DPD do dołków do próbek, następnie dodaj 50 μl streptawidyny-HRP do dołków do próbek i standardowych dołków (niezawierająca pustej studzienki kontrolnej). Dobrze wymieszaj. Przykryj płytę uszczelniaczem. Inkubować 60 minut w 37 ° C.

5. Usuń uszczelniacz i przemyj płytkę 5 razy buforem do przemywania. Namoczyć studzienki za pomocą co najmniej 0,35 ml buforu do płukania przez 30 sekund do 1 minuty na każde płukanie. W celu zautomatyzowanego mycia odessać wszystkie studzienki i przemyć 5-krotnie buforem do przemywania, przepełniając dołki buforem do przemywania. Wymieszać płytkę na ręcznikach papierowych lub innym chłonnym materiale.

6. Dodaj 50 μl roztworu substratu A do każdej studzienki, a następnie dodaj 50 μl roztworu substratu B do każdej studzienki. Inkubować płytkę pokrytą nowym uszczelniaczem przez 10 minut w temperaturze 37 ° C w ciemności.

7. Dodaj 50 μl roztworu zatrzymującego do każdej studzienki, niebieski kolor natychmiast zmieni kolor na żółty.

8. Określ gęstość optyczną (wartość OD) każdej studzienki natychmiast za pomocą czytnika mikropłytek ustawionego na 450 nm w ciągu 10 minut po dodaniu roztworu zatrzymującego.

C alokacja wyniku

Zbuduj krzywą standardową, wykreślając średnią OD dla każdego standardu na osi pionowej (Y) względem stężenia na osi poziomej (X) i narysuj krzywą najlepszego dopasowania przez punkty na wykresie. Te obliczenia można najlepiej wykonać za pomocą komputerowego oprogramowania dopasowującego krzywa, a linię najlepszego dopasowania można określić za pomocą analizy regresji.