Zestaw typu Sandwich Mouse Vitamin D3 ELISA do badań laboratoryjnych

Zestaw testowy ELISA VD3 ELISA Zestaw testowy ELISA dla myszy typu Sandwich

Nr kat. E 0457Mo

Standardowy zakres krzywej : 6.2ng / ml - 400ng / ml

Czułość : 2,82 ng / ml

Rozmiar : 96 dołków

Przechowywanie : Przechowywać odczynniki w temperaturze 2-8 ° C. W przypadku przechowywania przez ponad 6 miesięcy należy zapoznać się z datą ważności przechowywaną w temperaturze -20 ° C. Unikaj powtarzających się cykli odwilży. Jeśli pojedyncze odczynniki są otwarte, zaleca się, aby zestaw był używany w ciągu 1 miesiąca.

* Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do użytku badawczego, a nie do użytku w procedurach diagnostycznych. Przed użyciem zaleca się przeczytanie tej instrukcji.

P recyzja

Dokładność w ramach testu (dokładność w teście) Trzy próbki o znanym stężeniu przetestowano na jednej płytce w celu oceny precyzji wewnątrz testu.

Dokładność między testami (dokładność między testami) Trzy próbki o znanym stężeniu testowano w oddzielnych testach w celu oceny precyzji między testami.

CV (%) = SD / średnia x 100

Test wewnętrzny: CV <8%

Inter-Assay: CV <10%

Ntend U se

Ten zestaw kanapkowy służy do dokładnego ilościowego wykrywania Mysiej Witaminy D3 (znanej również jako VD3) w surowicy, osoczu, supernatantach hodowli komórkowej, lizatach komórkowych, homogenatach tkankowych.

Powiązanie

Ten zestaw jest testem immunoenzymatycznym (ELISA). Płytkę wstępnie powleczono przeciwciałem mysiego VD3. VD3 obecny w próbce jest dodawany i wiąże się z przeciwciałami pokrytymi w studzienkach. Następnie dodaje się biotynylowane przeciwciało mysie VD3 i wiąże się z VD3 w próbce. Następnie dodaje się streptawidynę-HRP i wiąże się z biotynylowanym przeciwciałem VD3. Po inkubacji niezwiązana Streptawidyna-HRP jest wymywana podczas etapu przemywania. Następnie dodaje się roztwór substratu i kolor rozwija się proporcjonalnie do ilości VD3 myszy. Reakcję zakończono przez dodanie kwaśnego roztworu zatrzymującego i zmierzono absorbancję przy 450 nm.

Kolekcja próbek

Surowica Pozwól surowicy skrzepnąć przez 10-20 minut w temperaturze pokojowej. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez 20 minut.

Osocze Zdobywaj osocze, używając EDTA lub heparyny jako antykoagulantu. Wirować próbki przez 15 minut przy 2000-3000 obrotów na minutę w temperaturze 2 - 8 ° C w ciągu 30 minut od pobrania.

Mocz zbierać sterylną rurką. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut. Podczas gromadzenia płynu ustno-otrzewnowego i płynu mózgowo-rdzeniowego należy postępować zgodnie z wyżej wymienionymi procedurami.

Komórka C u poz ą ę su-dernatant Gromadzić za pomocą sterylnych probówek podczas badania wydzielanych składników. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut. Zbierz ostrożnie supernatanty. Podczas badania składników w komórce należy użyć PBS (pH 7,2-7,4), aby rozcieńczyć zawiesinę komórek do stężenia komórek około 1 miliona / ml. Uszkadzaj komórki przez powtarzające się cykle zamrażania i rozmrażania, aby wypuścić składniki wewnętrzne. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut.

Tkankowe inne płyny ustrojowe Wypłucz tkanki w PBS (pH 7,4), aby dokładnie usunąć nadmiar krwi i zważ przed homogenizacją. Mielimy tkanki i homogenizujemy je w PBS (pH 7,4) za pomocą szklanego homogenizatora na lodzie. Rozmrozić w 2-8 ° C lub zamrozić w temperaturze -20 ° C. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut.

* Nie można rozcieńczać tego zestawu. Ze względu na materiał, którego używamy do przygotowania zestawu, zakłócenie matrycy próbki może fałszywie obniżyć swoistość i dokładność testu.

P ragmentacja P

Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej.

Standard Rozpuść 120 μl wzorca (480ng / ml) za pomocą 120 μl standardowego rozcieńczalnika, aby wytworzyć standardowy roztwór podstawowy 240ng / ml. Odstawić standard na 15 minut z delikatnym mieszaniem przed rozcieńczeniem. Przygotuj podwójne punkty standardowe, seryjnie rozcieńczając standardowy roztwór podstawowy (240ng / ml) 1: 2 standardowym rozcieńczalnikiem, aby uzyskać roztwory 120ng / ml, 60ng / ml, 30ng / ml i 15ng / ml. Standardowy rozcieńczalnik służy jako zerowy wzorzec (0 ng / ml). Pozostały roztwór należy zamrozić w temperaturze -20 ° C i zużyć w ciągu jednego miesiąca. Proponowane rozcieńczenia roztworów standardowych są następujące:

Bufor do przemywania Rozcieńczyć 20 ml koncentratu buforu płuczącego 30x do wody dejonizowanej lub destylowanej, aby uzyskać 500 ml 1x buforu do przemywania. Jeśli w koncentracie utworzyły się kryształy, delikatnie mieszaj, aż kryształy całkowicie się rozpuści.

P Rocedura

1. Przygotuj wszystkie odczynniki, roztwory standardowe i próbki zgodnie z instrukcją. Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej. Test przeprowadza się w temperaturze pokojowej.

2. Określ liczbę pasków wymaganych do testu. Wstaw paski w ramkach do użycia. Niewykorzystane paski należy przechowywać w temperaturze 2-8 ° C.

3. Dodać 50 μl wzorca do standardowej studzienki. Uwaga : Nie dodawaj przeciwciał do standardowej studzienki, ponieważ roztwór wzorcowy zawiera biotynylowane przeciwciało.

4. Dodaj 40 μl próbki do dołków do próbek, a następnie dodaj 10 μl przeciwciała anty-VD3 do dołków do próbek, a następnie dodaj 50 μl streptawidyny-HRP do dołków do próbek i standardowych dołków (niezawierająca ślepej próby kontrolnej). Dobrze wymieszaj. Przykryj płytę uszczelniaczem. Inkubować 60 minut w 37 ° C.

5. Usuń uszczelniacz i przemyj płytkę 5 razy buforem do przemywania. Namoczyć studzienki za pomocą co najmniej 0,35 ml buforu do płukania przez 30 sekund do 1 minuty na każde płukanie. W celu zautomatyzowanego mycia odessać wszystkie studzienki i przemyć 5-krotnie buforem do przemywania, przepełniając dołki buforem do przemywania. Wymieszać płytkę na ręcznikach papierowych lub innym chłonnym materiale.

6. Dodaj 50 μl roztworu substratu A do każdej studzienki, a następnie dodaj 50 μl roztworu substratu B do każdej studzienki. Inkubować płytkę pokrytą nowym uszczelniaczem przez 10 minut w temperaturze 37 ° C w ciemności.

7. Dodaj 50 μl roztworu zatrzymującego do każdej studzienki, niebieski kolor natychmiast zmieni kolor na żółty.

8. Określ gęstość optyczną (wartość OD) każdej studzienki natychmiast za pomocą czytnika mikropłytek ustawionego na 450 nm w ciągu 10 minut po dodaniu roztworu zatrzymującego.

C alokacja wyniku

Zbuduj krzywą standardową, wykreślając średnią OD dla każdego standardu na osi pionowej (Y) względem stężenia na osi poziomej (X) i narysuj krzywą najlepszego dopasowania przez punkty na wykresie. Te obliczenia można najlepiej wykonać za pomocą komputerowego oprogramowania dopasowującego krzywa, a linię najlepszego dopasowania można określić za pomocą analizy regresji.