Amyloidowy peptyd beta 1-42 Zestaw testowy ELISA 96 studzienek do badań laboratoryjnych

Test laboratoryjny Amyloidalny peptyd beta 1-42 Zestaw testowy ELISA dla ludzkich 96 studzienek

Nr kat. E 1264Hu

Standardowy zakres krzywej : 2ng / L - 600ng / L

Czułość : 1,08ng / L

Rozmiar : 96 dołków

Przechowywanie : Przechowywać odczynniki w temperaturze 2-8 ° C. W przypadku przechowywania przez ponad 6 miesięcy należy zapoznać się z datą ważności przechowywaną w temperaturze -20 ° C. Unikaj powtarzających się cykli odwilży. Jeśli pojedyncze odczynniki są otwarte, zaleca się, aby zestaw był używany w ciągu 1 miesiąca.

* Ten produkt służy wyłącznie do celów badawczych, a nie do użytku w procedurach diagnostycznych. Przed użyciem zaleca się przeczytanie tej instrukcji.

Powiązane zasady

Ten zestaw jest testem immunoenzymatycznym (ELISA). Płytkę wstępnie powleczono ludzkim przeciwciałem AB1-42. AB1-42 obecny w próbce jest dodawany i wiąże się z przeciwciałami pokrytymi w studzienkach. Następnie dodaje się biotynylowane ludzkie przeciwciało AB1-42 i wiąże się z AB1-42 w próbce. Następnie dodaje się Streptawidynę-HRP i wiąże się z biotynylowanym przeciwciałem AB1-42. Po inkubacji niezwiązana Streptawidyna-HRP jest wymywana podczas etapu przemywania. Następnie dodaje się roztwór substratu i kolor rozwija się proporcjonalnie do ilości ludzkiego AB1-42. Reakcję zakończono przez dodanie kwaśnego roztworu zatrzymującego i zmierzono absorbancję przy 450 nm.

Z ast ę z ą d ze ś ciowe

P przestrogi

• Przed użyciem zestaw do oznaczania ELISA i próbkę należy ogrzać w sposób naturalny do temperatury pokojowej 30 minut.
• Ta instrukcja musi być ściśle przestrzegana w eksperymencie.
• Po usunięciu pożądanej liczby pasków, natychmiast ponownie zamknij torebkę, aby zabezpieczyć pozostałą część przed zniszczeniem. Zakryj wszystkie odczynniki, gdy nie są używane.
• Upewnić się, że kolejność pipetowania i szybkość dodawania od dołków podczas odmierzania odczynników są dokładne.
• Końcówki pipety i uszczelniacz do płytek w ręce powinny być czyste i jednorazowe, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.
• Unikaj używania odczynników z różnych partii razem.
• Roztwór substratu B jest wrażliwy na światło, nie wystawiając roztworu B na światło przez długi czas.
• Roztwór zatrzymujący zawiera kwas. Podczas korzystania z tego materiału należy nosić okulary ochronne na oczy, dłonie i skórę. Unikać kontaktu skóry lub błon śluzowych z odczynnikiem zestawu.
• Zestawu nie należy używać po upływie terminu ważności.

Kolekcja próbek

Surowica Pozwól surowicy skrzepnąć przez 10-20 minut w temperaturze pokojowej. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez 20 minut.

Osocze Zdobywaj osocze, używając EDTA lub heparyny jako antykoagulantu. Wirować próbki przez 15 minut przy 2000-3000 obrotów na minutę w temperaturze 2 - 8 ° C w ciągu 30 minut od pobrania.

Mocz Zebrać za pomocą sterylnej rurki. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut. Podczas gromadzenia płynu ustno-otrzewnowego i płynu mózgowo-rdzeniowego należy postępować zgodnie z wyżej wymienionymi procedurami.

Komórka C u poz ąnn ę su-pochłaniacza Zebrać za pomocą sterylnych probówek podczas badania wydzielanych składników. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut. Zbierz ostrożnie supernatanty. Podczas badania składników w komórce należy użyć PBS (pH 7,2-7,4), aby rozcieńczyć zawiesinę komórek do stężenia komórek około 1 miliona / ml. Uszkadzaj komórki przez powtarzające się cykle zamrażania i rozmrażania, aby wypuścić składniki wewnętrzne. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut.

Tkankowe inne płyny ustrojowe Wypłucz tkanki w PBS (pH 7,4), aby dokładnie usunąć nadmiar krwi i zważ przed homogenizacją. Mielimy tkanki i homogenizujemy je w PBS (pH 7,4) za pomocą szklanego homogenizatora na lodzie. Rozmrozić w 2-8 ° C lub zamrozić w temperaturze -20 ° C. Wirować przy 2000-3000 obr / min przez około 20 minut.

* Nie można rozcieńczać tym zestawem do oznaczania ELISA. Ze względu na materiał, którego używamy do przygotowania zestawu, zakłócenie matrycy próbki może fałszywie obniżyć swoistość i dokładność testu.

P ragacja naprawcza

Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej.

Standard Odtworzyć 120 μl wzorca (800ng / l) z 120 μl standardowego rozcieńczalnika w celu wytworzenia standardowego roztworu podstawowego o stężeniu 400ng / L. Odstawić standard na 15 minut z delikatnym mieszaniem przed rozcieńczeniem. Przygotuj zduplikowane standardowe punkty, seryjnie rozcieńczając standardowy roztwór podstawowy (400ng / L) 1: 2 przy użyciu standardowego rozcieńczalnika, aby wytworzyć roztwory 200ng / L, 100ng / L, 50ng / L i 25ng / L. Standardowy rozcieńczalnik służy jako zerowy standard (0 ng / L). Pozostały roztwór należy zamrozić w temperaturze -20 ° C i zużyć w ciągu jednego miesiąca. Proponowane rozcieńczenia roztworów standardowych są następujące:

Bufor do przemywania Rozcieńczyć 20 ml koncentratu buforu płuczącego 30x do wody dejonizowanej lub destylowanej, aby uzyskać 600 ml 1x buforu do przemywania. Jeśli w koncentracie utworzyły się kryształy, delikatnie mieszaj, aż kryształy całkowicie się rozpuści.

S ummary

1. Przygotuj wszystkie odczynniki, próbki i standardy.

2. Do każdej studzienki dodaj próbkę i odczynnik ELISA. Inkubować przez 1 godzinę w 37 ° C.

3. Umyj płytkę 5 razy.

4. Dodaj roztwór substratu A i B. Inkubuj przez 10 minut w 37 ° C.

5. Dodaj roztwór zatrzymujący i kolor się rozwija.

6. Odczytaj wartość OD w ciągu 10 minut.

C alokacja wyniku

Zbuduj krzywą standardową, wykreślając średnią OD dla każdego standardu na osi pionowej (Y) względem stężenia na osi poziomej (X) i narysuj krzywą najlepszego dopasowania przez punkty na wykresie. Te obliczenia można najlepiej wykonać za pomocą komputerowego oprogramowania dopasowującego krzywa, a linię najlepszego dopasowania można określić za pomocą analizy regresji.