Zestaw badawczy OXTR Sandwich ELISA Test Precyzyjny receptor oksytocyny psiej

Dostosowany zestaw do testu ELISA OXTR Sandwich Zestaw do testu ELISA o wysokiej precyzji dla oksytocyny psiej ELISA

Nr kat. E 0291Ca

* Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do celów badawczych, nie do użytku w procedurach diagnostycznych. Zaleca się przeczytanie tej instrukcji przed użyciem.

I ntended U se

Ten zestaw kanapkowy służy do dokładnego ilościowego wykrywania receptora oksytocyny psów (znanego również jako OXTR) w surowicy, osoczu, supernatantach hodowli komórkowej, lizatach komórkowych, homogenatach tkankowych.

Środki ostrożności

• Przed użyciem zestaw testowy ELISA i próbkę należy ogrzać naturalnie do temperatury pokojowej przez 30 minut.
• Ta instrukcja musi być ściśle przestrzegana w eksperymencie.
• Po usunięciu żądanej liczby pasków natychmiast ponownie zamknij worek, aby zabezpieczyć pozostałość przed zniszczeniem. Zakryj wszystkie odczynniki, gdy nie są używane.
• Upewnij się, że kolejność pipetowania i szybkość dodawania od dobrze do dobrze pipetujących odczynników.
• Końcówki pipet i zgrzewarka do płyt powinny być czyste i jednorazowe, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.
• Unikaj używania odczynników pochodzących z różnych partii.
• Roztwór substratu B jest wrażliwy na światło, nie wystawiaj roztworu substratu B na działanie światła przez długi czas.
• Roztwór zatrzymujący zawiera kwas. Podczas korzystania z tego materiału należy nosić ochronę oczu, dłoni i skóry. Unikać kontaktu skóry lub błon śluzowych z odczynnikiem zestawu.
• Zestaw testowy ELISA nie powinien być używany po upływie daty ważności.

R eagent P rovided

M aterial R equired B ut N ot Dostarczane

• Inkubator o temperaturze 37 ° C ± 0,5 ° C
• Papier chłonny
• Precyzyjne pipety i jednorazowe końcówki do pipet
• Wyczyść rury
• Woda dejonizowana lub destylowana
• Czytnik mikropłytek z filtrem długości fali 450 ± 10 nm

Kolekcja próbek

Surowica Pozwolić, aby surowica skrzepła przez 10-20 minut w temperaturze pokojowej. Wiruj przy 2000-3000 RPM przez 20 minut.

Osocze Zbierz osocze za pomocą EDTA lub heparyny jako antykoagulantu. Wirować próbki przez 15 minut przy 2000-3000 RPM w temperaturze 2 - 8 ° C w ciągu 30 minut od pobrania.

Mocz Odbierz przez sterylną rurkę. Wirować przy 2000-3000 RPM przez około 20 minut. Podczas zbierania płynu opłucnowego i płynu mózgowo-rdzeniowego postępuj zgodnie z wyżej wymienionymi procedurami.

Komercyjn e proberat ciał komórek Zebrać za pomocą sterylnych probówek podczas badania wydzielonych składników. Wirować przy 2000-3000 RPM przez około 20 minut. Zebrać ostrożnie supernatanty. Podczas badania składników w komórce, użyj PBS (pH 7,2-7,4), aby rozcieńczyć zawiesinę komórek do stężenia komórek około 1 milion / ml. Uszkadzaj komórki poprzez powtarzane cykle zamrażania-rozmrażania, aby wypuścić składniki wewnętrzne. Wirować przy 2000-3000 RPM przez około 20 minut.

Tkanki innych płynów ustrojowych Przepłukać tkanki w PBS (pH 7,4), aby dokładnie usunąć nadmiar krwi i zważyć przed homogenizacją. Zmiel tkanki i homogenizuj je w PBS (pH 7,4) za pomocą szklanego homogenizatora na lodzie. Rozmrozić w temperaturze 2-8 ° C lub zamrozić w temperaturze -20 ° C. Wirować przy 2000-3000 RPM przez około 20 minut.

* W tym zestawie nie można rozcieńczyć . Ze względu na materiał, którego używamy do przygotowania zestawu, interferencja matrycy próbki może fałszywie obniżyć specyficzność i dokładność testu.

R eagent P reparation

Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej

Standard Rekonstytuuj 120 μl wzorca (64 ng / ml) 120 μl standardowego rozcieńczalnika, aby otrzymać standardowy roztwór podstawowy o objętości 32 ng / ml. Pozwól, aby wzorzec pozostawał na 15 minut z delikatnym mieszaniem przed wykonaniem rozcieńczeń. Przygotuj duplikaty standardowych punktów przez seryjne rozcieńczenie standardowego roztworu podstawowego (32 ng / ml) 1: 2 standardowym rozcieńczalnikiem, aby uzyskać roztwory 16 ng / ml, 8 ng / ml, 4 ng / ml i 2 ng / ml. Standardowy rozcieńczalnik służy jako wzorzec zerowy (0 ng / ml). Wszelkie pozostałe roztwory należy zamrozić w temperaturze -20 ° C i zużyć w ciągu jednego miesiąca. Proponowane rozcieńczenia standardowych roztworów są następujące:

Bufor do przemywania Rozcieńczyć 20 ml buforu do przemywania Zatężyć 25x w wodzie dejonizowanej lub destylowanej, aby uzyskać 500 ml 1x buforu płuczącego. Jeśli w koncentracie utworzyły się kryształy, delikatnie mieszaj, aż kryształy całkowicie się rozpuściją.

Procedura Sayay

1. Przygotuj wszystkie odczynniki, roztwory standardowe i próbki zgodnie z instrukcją. Przed użyciem wszystkie odczynniki doprowadzić do temperatury pokojowej. Test przeprowadza się w temperaturze pokojowej.

2. Określ liczbę pasków wymaganych do testu. Włóż paski do ramek do użycia. Niewykorzystane paski należy przechowywać w temperaturze 2-8 ° C.

3. Dodaj standard 50μl do standardowego dołka. Uwaga : Nie dodawaj przeciwciał do standardowej studzienki, ponieważ standardowy roztwór zawiera biotynylowane przeciwciało.

4. Dodać 40 µl próbki do dołków na próbki, a następnie dodać 10 µl przeciwciała anty-OXTR do dołków do próbek, następnie dodać 50 µl streptawidyny-HRP do dołków próbek i studzienek standardowych (studzienka kontrolna nie pusta). Dobrze wymieszaj. Przykryj płytkę uszczelniaczem. Inkubować 60 minut w 37 ° C.

5. Wyjąć uszczelniacz i umyć płytkę 5 razy buforem do płukania. Namoczyć studzienki co najmniej 0,35 ml buforu do przemywania przez 30 sekund do 1 minuty dla każdego prania. W celu automatycznego płukania odessać wszystkie dołki i przemyć 5 razy buforem do płukania, przepełniając studzienki buforem do płukania. Blotować talerz na papierowych ręcznikach lub innym chłonnym materiale.

6. Dodaj 50 µl roztworu substratu A do każdej studzienki, a następnie dodaj 50 µl roztworu substratu B do każdej studzienki. Inkubować płytkę pokrytą nowym uszczelniaczem przez 10 minut w temperaturze 37 ° C w ciemności.

7. Dodaj 50 µl roztworu zatrzymującego do każdej studzienki, niebieski kolor natychmiast zmieni się na żółty.

8. Określić gęstość optyczną (wartość OD) każdego dołka natychmiast przy użyciu czytnika mikropłytek ustawionego na 450 nm w ciągu 10 minut po dodaniu roztworu zatrzymującego.