Test immunosorbentu sprzężonego z enzymem IL-6 typu Sandwich z psim Elisa 96 dołków

96-studzienkowy zestaw do oznaczania immunosorbentu IL-6 typu Sandwich typu IL-6 z usługą Oem

Cat.No E 0006Ca
Zakres krzywej standardowej : 2 pg / ml - 700 pg / ml
Czułość : 1,02 pg / ml
Rozmiar : 96 dołków
Przechowywanie : Przechowywać odczynniki w temperaturze 2-8 ° C. Przez ponad 6 miesięcy przechowywania należy przestrzegać daty ważności, utrzymując ją w temperaturze -20 ° C. Unikaj powtarzających się cykli rozmrażania. W przypadku otwarcia poszczególnych odczynników zaleca się użycie zestawu w ciągu 1 miesiąca.
* Ten produkt jest przeznaczony wyłącznie do celów badawczych, nie do użytku w procedurach diagnostycznych. Zaleca się przeczytanie tej instrukcji przed użyciem.

Procedura Sayay
1. Przygotuj wszystkie odczynniki, roztwory standardowe i próbki zgodnie z instrukcją. Przed użyciem wszystkie odczynniki doprowadzić do temperatury pokojowej. Test przeprowadza się w temperaturze pokojowej.
2. Określ liczbę pasków wymaganych do testu. Włóż paski do ramek do użycia. Niewykorzystane paski należy przechowywać w temperaturze 2-8 ° C.
3. Dodaj standard 50μl do standardowego otworu. Uwaga: Nie dodawaj przeciwciał do standardowego otworu, ponieważ standardowy roztwór zawiera biotynylowane przeciwciało.
4. Dodać 40 µl próbki do dołków na próbki, a następnie dodać 10 µl przeciwciała anty-IL-10 do dołków do próbek, następnie dodać 50 µl streptawidyny-HRP do dołków na próbki i dołków standardowych (studzienka kontrolna nie pusta). Dobrze wymieszaj. Przykryj płytkę uszczelniaczem. Inkubować 60 minut w 37 ° C.
5. Wyjąć uszczelniacz i umyć płytkę 5 razy buforem do płukania. Namoczyć studzienki co najmniej 0,35 ml buforu do przemywania przez 30 sekund do 1 minuty dla każdego prania. Do automatycznego mycia, odessać wszystkie dołki i przemyć 5 razy buforem do płukania, przepełniając studzienki buforem do płukania. Blotować talerz na papierowych ręcznikach lub innym chłonnym materiale.
6. Dodaj 50 µl roztworu substratu A do każdej studzienki, a następnie dodaj 50 µl roztworu substratu B do każdej studzienki. Inkubować płytkę pokrytą nowym uszczelniaczem przez 10 minut w temperaturze 37 ° C w ciemności.
7. Dodaj 50 µl roztworu zatrzymującego do każdej studzienki, niebieski kolor natychmiast zmieni się na żółty.
8. Określić gęstość optyczną (wartość OD) każdego dołka natychmiast przy użyciu czytnika mikropłytek ustawionego na 450 nm w ciągu 10 minut po dodaniu roztworu zatrzymującego.

Umary
1. Przygotuj wszystkie odczynniki, próbki i standardy.
2. Dodaj próbkę i odczynnik ELISA do każdego dołka. Inkubować przez 1 godzinę w 37 ° C.
3. Umyj płytkę 5 razy.
4. Dodać roztwór substratu A i B. Inkubować przez 10 minut w 37 ° C.
5. Dodaj roztwór zatrzymujący i powstanie kolor.
6. Odczytaj wartość OD w ciągu 10 minut.

P recesja
Precyzja w teście (precyzja w teście) Trzy próbki o znanym stężeniu testowano na jednej płytce, aby ocenić precyzję wewnątrz testu.
Precyzja między testami (precyzja między testami) Trzy próbki o znanym stężeniu testowano w oddzielnych testach, aby ocenić precyzję między testami.
CV (%) = SD / średnia x 100
Intra-Assay: CV <8%
Inter-Assay: CV <10%

Środki ostrożności

• Przed użyciem zestaw testowy elisa i próbkę należy ogrzać naturalnie do temperatury pokojowej 30 minut.
• Ta instrukcja musi być ściśle przestrzegana w eksperymencie.
• Po usunięciu żądanej liczby pasków natychmiast ponownie zamknij worek, aby zabezpieczyć pozostałość przed zniszczeniem. Zakryj wszystkie odczynniki, gdy nie są używane.
• Upewnij się, że kolejność pipetowania i szybkość dodawania od dobrze do dobrze pipetujących odczynników.
• Końcówki pipet i zgrzewarka do płyt powinny być czyste i jednorazowe, aby uniknąć zanieczyszczenia krzyżowego.
• Unikaj używania odczynników pochodzących z różnych partii.
• Roztwór substratu B jest wrażliwy na światło, nie wystawiaj roztworu substratu B na działanie światła przez długi czas.
• Roztwór zatrzymujący zawiera kwas. Podczas korzystania z tego materiału należy nosić ochronę oczu, dłoni i skóry. Unikać kontaktu skóry lub błon śluzowych z odczynnikiem zestawu.
• Zestaw testowy elisa nie powinien być używany po upływie daty ważności.

R eagent P reparation
Przed użyciem wszystkie odczynniki należy doprowadzić do temperatury pokojowej.
Standard Rekonstytuuj 120 μl standardu (800 μg / ml) 120 μl standardowego rozcieńczalnika, aby uzyskać standardowy roztwór podstawowy 400 pg / ml. Pozwól, aby wzorzec pozostawał na 15 minut z delikatnym mieszaniem przed wykonaniem rozcieńczeń. Przygotuj duplikaty standardowych punktów przez seryjne rozcieńczenie standardowego roztworu podstawowego (400 pg / ml) 1: 2 standardowym rozcieńczalnikiem, aby uzyskać roztwory 200 pg / ml, 100 pg / ml, 50 pg / ml i 25 pg / ml. Standardowy rozcieńczalnik służy jako wzorzec zerowy (0 pg / ml). Wszelkie pozostałe roztwory należy zamrozić w temperaturze -20 ° C i zużyć w ciągu jednego miesiąca. Proponowane rozcieńczenia standardowych roztworów są następujące:

Bufor do przemywania Rozcieńczyć 20 ml buforu do przemywania Zatężyć 30x w wodzie dejonizowanej lub destylowanej, uzyskując 600 ml 1x buforu do przemywania. Jeśli w koncentracie utworzyły się kryształy, delikatnie mieszaj, aż kryształy całkowicie się rozpuściją.

Obliczanie wyniku
Skonstruuj krzywą standardową, wykreślając średnią gęstość optyczną dla każdego standardu na osi pionowej (Y) względem stężenia na osi poziomej (X) i narysuj krzywą najlepszego dopasowania przez punkty na wykresie. Obliczenia te można najlepiej wykonać za pomocą oprogramowania do dopasowywania krzywych za pomocą komputera, a linię najlepszego dopasowania można określić za pomocą analizy regresji.